尤斯灌流系統(tǒng)（UssingChamber）用于離體上皮組織/細(xì)胞層的跨膜轉(zhuǎn)運與電生理研究，操作核心是組織固定、雙側(cè)灌流、恒溫供氧、電信號采集，標(biāo)準(zhǔn)流程如下：
一、實驗前準(zhǔn)備
系統(tǒng)清潔與組裝
清洗尤斯室、管路、電極；組裝腔體，安裝Ag/AgCl電極（電壓傳感、電流通過）與鹽橋，確保密封無滲漏。
溶液配制與預(yù)氧
配制Ringer液/克氏液，通95%O?+5%CO?30分鐘以上，維持pH與氧分壓；開啟37℃恒溫與磁力攪拌。
組織/細(xì)胞制備
組織：取腸道、氣道等上皮，剝離黏膜層，修剪成合適大小。
細(xì)胞：Transwell培養(yǎng)單層上皮，待形成緊密連接后使用。
二、組織安裝與灌流
組織固定
將組織/細(xì)胞夾在尤斯室兩半之間，黏膜側(cè)（頂側(cè)）、漿膜側(cè)（基底側(cè)）嚴(yán)格區(qū)分，鎖緊腔體防漏液。
雙側(cè)灌流
頂側(cè)、基底側(cè)分別注入預(yù)氧灌流液，開啟循環(huán)/連續(xù)灌流，排除氣泡；維持液面一致，啟動攪拌。
平衡穩(wěn)定
灌流平衡30–60分鐘，待跨膜電位（PD）、短路電流（Isc）、電阻（TEER）穩(wěn)定，確認(rèn)組織活性。
三、電生理檢測與實驗干預(yù)
基線記錄
電壓鉗/電流鉗采集PD、Isc、TEER，記錄基線數(shù)據(jù)。
給藥/處理
頂側(cè)或基底側(cè)加入藥物、待測物、離子等，觀察電信號動態(tài)變化；可設(shè)對照組、濃度梯度組。
數(shù)據(jù)采集
持續(xù)記錄Isc、TEER變化，分析轉(zhuǎn)運速率、通透性、離子通道活性。
四、實驗結(jié)束與后處理
停止灌流
關(guān)閉灌流、攪拌、恒溫，取出電極與鹽橋。
組織/腔體清潔
取出組織/細(xì)胞；用清水、溫和清潔劑清洗腔體與管路，干燥保存；電極維護(hù)（AgCl層定期處理）。
數(shù)據(jù)導(dǎo)出與分析
導(dǎo)出電生理數(shù)據(jù)，計算轉(zhuǎn)運量、通透性、通道電流等指標(biāo)。
關(guān)鍵要點
密封防漏是核心，漏液會導(dǎo)致電信號異常、實驗失敗。
持續(xù)供氧+恒溫是維持組織活性的關(guān)鍵。
電極需校準(zhǔn)，避免電位漂移影響數(shù)據(jù)準(zhǔn)確性。
更新時間：2026-03-23
點擊次數(shù)：174
掃碼加微信
我的位置：